Rakukultuuride saastumine võib kergesti muutuda rakukultuuri laborites levinuimaks probleemiks, põhjustades mõnikord väga tõsiseid tagajärgi.Rakukultuuri saasteained võib jagada kahte kategooriasse: keemilised saasteained nagu sööde, seerumi ja vee lisandid, endotoksiinid, plastifikaatorid ja detergendid ning bioloogilised saasteained, nagu bakterid, hallitusseened, pärmid, viirused, mükoplasmade ristnakkus.Saastunud teiste rakuliinidega.Kuigi saastumist on võimatu täielikult kõrvaldada, saab selle esinemissagedust ja tõsidust vähendada, kui mõistate põhjalikult selle allikat ja järgige häid aseptilisi tehnikaid.
1. Selles jaotises kirjeldatakse peamisi bioloogilise saaste tüüpe:
Bakteriaalne saastumine
Hallitus- ja viirussaaste
Mükoplasma saastumine
Pärmi saastumine
1.1 Bakteriaalne saastumine
Bakterid on suur rühm üldlevinud üherakulisi mikroorganisme.Tavaliselt on need vaid mõne mikroni läbimõõduga ja võivad olla erineva kujuga, alates keradest kuni varraste ja spiraalideni.Oma üldlevinud, suuruse ja kiire kasvukiiruse tõttu on bakterid koos pärm- ja hallitusseentega rakukultuuris kõige levinumad bioloogilised saasteained.
1.1.1 Bakteriaalse saastumise tuvastamine
Bakteriaalne saastumine on kergesti tuvastatav kultuuri visuaalse kontrolliga mõne päeva jooksul pärast nakatumist;
Nakatunud kultuurid on tavaliselt hägused (st hägused), mõnikord õhukese kile pinnal.
Sageli esineb ka söötme pH järske langusi.
Väikese võimsusega mikroskoobi all paistavad bakterid rakkude vahel pisikeste liikuvate graanulitena ning suure võimsusega mikroskoobi all vaatlemine võib üksikute bakterite kujusid lahendada.
1.2 Hallitus- ja viirussaaste
1.2.1 Hallitusseentega saastumine
Hallitusseened on seeneriigi eukarüootsed mikroorganismid, mis kasvavad mitmerakuliste niitide kujul, mida nimetatakse hüüfideks.Nende mitmerakuliste filamentide ühendusvõrgud sisaldavad geneetiliselt identseid tuumasid, mida nimetatakse kolooniateks või mütseelideks.
Sarnaselt pärmiga saastumisele jääb kultuuri pH saastumise algfaasis stabiilseks ja tõuseb seejärel kiiresti, kui kultuur nakatub tõsisemalt ja muutub häguseks.Mikroskoobi all on seeneniidistik tavaliselt niitjas, mõnikord tihedate eoskobaratena.Paljude hallitusseente eosed võivad puhkefaasis ellu jääda äärmiselt karmis ja ebasõbralikus keskkonnas ning aktiveeruvad alles siis, kui tekivad õiged kasvutingimused.
1.2.2 Viirustega saastumine
Viirused on mikroskoopilised nakkusetekitajad, mis võtavad üle peremeesraku paljunemismehhanismid.Nende äärmiselt väike suurus muudab nende tuvastamise kultuuris ja rakukultuuri laborites kasutatavatest reagentidest raskesti eemaldatavaks.Kuna enamikul viirustel on peremeesorganismidele väga ranged nõuded, ei mõjuta need tavaliselt teiste liikide rakukultuure peale peremeesorganismi.
Viirustega nakatunud rakukultuuride kasutamine võib aga kujutada tõsist ohtu laboritöötajate tervisele, eriti kui laboris kasvatatakse inimese või primaadi rakke.
Viirusnakkust rakukultuurides saab tuvastada elektronmikroskoopia, antikehade komplektiga immunovärvimise, ELISA või PCR abil sobivate viiruspraimeritega.
1.3 Mükoplasma saastumine
Mükoplasmad on lihtsad rakuseinata bakterid ja arvatakse, et need on väikseimad isepaljunevad organismid.Äärmiselt väikese suuruse (tavaliselt alla 1 mikroni) tõttu on mükoplasmat raske avastada, kuni nad saavutavad ülikõrge tiheduse ja põhjustavad rakukultuuride riknemist;Kuni selle ajani pole tavaliselt ilmseid nakkuse tunnuseid.
1.3.1 Mükoplasma saastumise tuvastamine
Mõned aeglaselt kasvavad mükoplasmad võivad kultuurides püsida, põhjustamata rakusurma, kuid need muudavad peremeesrakkude käitumist ja ainevahetust kultuurides.
Kroonilist mükoplasma infektsiooni võib iseloomustada rakkude proliferatsiooni kiiruse vähenemine, küllastustiheduse vähenemine ja aglutinatsioon suspensioonikultuuris.
Ainus usaldusväärne viis mükoplasma saastumise tuvastamiseks on aga kultuuri korrapärane testimine, kasutades fluorestsentsvärvimist (nt Hoechst 33258), ELISA-d, PCR-i, immunovärvimist, autoradiograafiat või mikroobtesti.
1.4 Pärmi saastumine
Pärmid on seeneriigi üherakulised eukarüootid, mille suurus ulatub mõnest mikronist (tavaliselt) kuni 40 mikronini (harva).
1.4.1Pärmi saastumise tuvastamine
Nagu bakteriaalse saastumise puhul, võivad pärmiga saastunud kultuurid muutuda häguseks, eriti kui saastumine on kaugelearenenud.Pärmseenega saastunud kultuuride pH muutub väga vähe, kuni saastumine muutub tugevamaks, mille staadiumis pH tavaliselt tõuseb.Mikroskoobi all näib pärm üksikute munajate või sfääriliste osakestena ja võib toota väiksemaid osakesi.
2.Ristinfektsioon
Kuigi see ei ole nii levinud kui mikroobne saastumine, on paljude rakuliinide ulatuslik ristsaastumine HeLa ja teiste kiiresti kasvavate rakuliinidega selgelt määratletud tõsiste tagajärgedega probleem.Hankige rakuliinid usaldusväärsetest rakupankadest, kontrollige regulaarselt rakuliinide omadusi ja kasutage häid aseptilisi tehnikaid.Need tavad aitavad teil vältida ristsaastumist.DNA sõrmejälgede võtmine, karüotüüpimine ja isotüüpimine võivad kinnitada, kas teie rakukultuuris on ristsaastumine.
Kuigi see ei ole nii levinud kui mikroobne saastumine, on paljude rakuliinide ulatuslik ristsaastumine HeLa ja teiste kiiresti kasvavate rakuliinidega selgelt määratletud tõsiste tagajärgedega probleem.Hankige rakuliinid usaldusväärsetest rakupankadest, kontrollige regulaarselt rakuliinide omadusi ja kasutage häid aseptilisi tehnikaid.Need tavad aitavad teil vältida ristsaastumist.DNA sõrmejälgede võtmine, karüotüüpimine ja isotüüpimine võivad kinnitada, kas teie rakukultuuris on ristsaastumine.
Postitusaeg: 01.02.2023