1. Õige rakuliini valimine
Katse jaoks sobiva rakuliini valimisel võtke arvesse järgmisi kriteeriume:
a.Liik: mitteinimese ja mitteprimaadi rakuliinidel on tavaliselt vähem bioloogilise ohutuse piiranguid, kuid lõpuks otsustab teie katse, kas kasutada konkreetse liigi kultuuri.
b. Omadused: mis on teie katse eesmärk?Näiteks võivad maksast ja neerust pärinevad rakuliinid olla toksilisuse testimiseks sobivamad.
c. Piiratud või pidev: kuigi piiratud rakuliini hulgast valimine võib pakkuda teile rohkem võimalusi õige funktsiooni väljendamiseks, on pidevaid rakuliine üldiselt lihtsam kloonida ja hooldada.
d. Normaalne või transformeeritud: transformeeritud rakuliinidel on tavaliselt suurem kasvukiirus ja suurem külviefektiivsus, need on pidevad ja vajavad vähem seerumit kultuurisöötmes, kuid nende fenotüüp on geneetilise transformatsiooni kaudu läbi teinud püsivaid muutusi.
e. Kasvutingimused ja -omadused: millised on teie nõuded kasvukiirusele, küllastustihedusele, kloonimise efektiivsusele ja suspensiooni kasvuvõimele?Näiteks rekombinantsete valkude suure saagisega ekspresseerimiseks peate võib-olla valima rakuliinid, millel on kiire kasvukiirus ja võime kasvada suspensioonis.
f.Muud kriteeriumid: kui kasutate piiratud rakuliini, kas varusid on piisavalt?Kas rakuliin on täielikult iseloomustatud või peate seda ise kontrollima?Kui kasutate ebanormaalset rakuliini, kas on olemas samaväärne normaalne rakuliini, mida saab kasutada kontrollina?Kas rakuliin on stabiilne?Kui ei, siis kui lihtne on seda kloonida ja luua katse jaoks piisavalt külmutatud varu?
2. Hankige rakuliinid
Saate luua oma kultuuri primaarsetest rakkudest või osta väljakujunenud rakukultuure kaubanduslikelt või mittetulunduslikelt tarnijatelt (st rakupankadelt).Tuntud tarnijad pakuvad kvaliteetseid rakuliine, mille terviklikkust on hoolikalt testitud ja mis tagavad, et kultuur on saasteainetevaba.Soovitame mitte laenata kultuure teistest laboritest, kuna neil on suur rakukultuuri saastumise oht.Olenemata selle allikast, veenduge, et kõik uued rakuliinid on enne nende kasutamise alustamist mükoplasmaga saastumise suhtes testitud.
Postitusaeg: 01.02.2023