1.Mis on rakukultuur?
Rakukultuur tähendab rakkude eemaldamist loomadelt või taimedelt ja seejärel nende kasvatamist soodsas tehiskeskkonnas.Rakke võib võtta otse koest ja enne kultiveerimist ensümaatiliste või mehaaniliste vahenditega lagundada või need võib tuletada väljakujunenud rakuliinidest või rakuliinidest.
2.Mis on esmane kultuur?
Esmane kultuur viitab kultiveerimisfaasile pärast seda, kui rakud on koest eraldatud ja prolifereeruvad sobivates tingimustes, kuni nad hõivavad kõik saadaolevad substraadid (st jõuavad ühinemiseni).Selles etapis tuleb rakud subkultuurida, viies need uude mahutisse värske kasvusöötmega, et anda jätkuvaks kasvuks rohkem ruumi.
2.1 Rakuliin
Pärast esimest subkultuuri nimetatakse primaarset kultuuri rakuliiniks või subklooniks.Primaarsetest kultuuridest saadud rakuliinidel on piiratud eluiga (st need on piiratud; vt allpool) ja nende möödumisel domineerivad suurima kasvuvõimega rakud, mille tulemuseks on fenotüübile vastav populatsiooni teatud genotüüp.
2.2 Rakutüvi
Kui rakuliini alampopulatsioon valitakse kultuurist positiivselt kloonimise või mõne muu meetodi abil, muutuks rakuliin rakutüviks.Tavaliselt omandavad rakutüved täiendavaid geneetilisi muutusi pärast vanemliini algust.
3. Piiratud ja pidevad rakuliinid
Normaalsed rakud jagunevad tavaliselt vaid piiratud arvu kordi, enne kui kaotavad vohamisvõime.See on geneetiliselt määratud sündmus, mida nimetatakse vananemiseks;neid rakuliine nimetatakse lõplikeks rakuliinideks.Mõned rakuliinid muutuvad aga surematuks protsessi, mida nimetatakse transformatsiooniks, kaudu, mis võib toimuda spontaanselt või olla kemikaalide või viiruste poolt esile kutsutud.Kui piiratud rakuliin läbib transformatsiooni ja omandab võime lõpmatuseni jaguneda, muutub see pidevaks rakuliiniks.
4.Kultuuri seisukord
Iga rakutüübi kultiveerimistingimused on väga erinevad, kuid tehiskeskkond rakkude kultiveerimiseks koosneb alati sobivast anumast, mis sisaldab järgmist:
4.1 Substraat või sööde, mis pakub olulisi toitaineid (aminohapped, süsivesikud, vitamiinid, mineraalid)
4.2 Kasvutegurid
4.3 Hormoonid
4.4 Gaasid (O2, CO2)
4.5 Reguleeritud füüsikaline ja keemiline keskkond (pH, osmootne rõhk, temperatuur)
Enamik rakke on ankurdussõltuvad ja neid tuleb kasvatada tahkel või pooltahkel substraadil (kleepuv või ühekihiline kultuur), samas kui teised rakud võivad kasvada söötmes hõljudes (suspensioonkultuur).
5.Külmsäilitamine
Kui subkultuuris on rakke ülemäära, tuleb neid töödelda sobiva kaitsevahendiga (nagu DMSO või glütserool) ja hoida temperatuuril alla -130°C (külmsäilitamine), kuni neid vajatakse.Lisateavet rakkude subkultuuri ja külmsäilitamise kohta.
6.Rakkude morfoloogia kultuuris
Kultuuris olevad rakud võib nende kuju ja välimuse (st morfoloogia) alusel jagada kolme põhikategooriasse.
6.1 Fibroblasti rakud on bipolaarsed või multipolaarsed, pikliku kujuga ja kasvavad substraadi külge kinnitunud.
6.2 Epiteelilaadsed rakud on hulknurksed, korrapärasema suurusega ja kinnituvad maatriksile eraldiseisvate lehtedena.
6.3 Lümfoblastitaolised rakud on sfäärilised ja kasvavad tavaliselt suspensioonis ilma pinna külge kinnitumata.
7.Rakukultuuri rakendamine
Rakukultuur on üks peamisi raku- ja molekulaarbioloogias kasutatavaid vahendeid.See on suurepärane mudelsüsteem rakkude normaalse füsioloogia ja biokeemia (nagu metaboolsed uuringud, vananemine), ravimite ja toksiliste ühendite mõju rakkudele ning mutageneesi ja kantserogeensete mõjude uurimiseks.Seda kasutatakse ka ravimite skriinimiseks ja väljatöötamiseks ning bioloogiliste ühendite (nagu vaktsiinid, terapeutilised valgud) suuremahuliseks tootmiseks.Kõigi nende rakenduste jaoks rakukultuuri kasutamise peamine eelis on kloonitud rakkude partii kasutades saadavate tulemuste järjepidevus ja reprodutseeritavus.
Postitusaeg: juuni-03-2019